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1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了采用膜過濾法測(cè)定入出境船舶壓艙水中大腸菌群(coliforms)的程序和方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于對(duì)入出境船舶壓艙水中的大腸菌群進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2.設(shè)備和材料

2.1 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃。

2.2 冰箱:2℃～8℃。

2.3 100mL量筒:滅菌。

2.4 膜過濾裝置:見4.1.2。

2.5 無菌纖維素酯濾膜,白色,帶格柵,直徑47mm,孔徑0.45μm。

2.6 無菌移液管:10mL,*到0.1mL。

2.7 無菌生理鹽水。

2.8 錐形瓶:150mL。

2.9 紫外線燈:波長(zhǎng)366nm。

2.10 無菌培養(yǎng)皿:直徑50mm。

2.11 無菌濾器:孔徑0.22μm。

2.12 MI培養(yǎng)基:見附錄A。

3.檢測(cè)程序

大腸菌群檢測(cè)程序見圖1。

4.操作步驟

4.1 準(zhǔn)備

4.1.1 制備MI瓊脂培養(yǎng)基,4℃保存的培養(yǎng)基應(yīng)待溫度恢復(fù)至室溫備用。

4.1.2 裝配過濾裝置:用消毒鑷子夾取無菌濾膜置于濾器多孔盤上,格柵面向上,裝配濾杯與濾器基座,連接緩沖瓶、真空泵(無真空泵可用注射器代替)。過濾裝置示意見圖2。

4.1.3 樣品稀釋:用無菌移液管移取10mL水樣至盛有90mL無菌生理鹽水的錐形瓶?jī)?nèi),充分混勻,根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì),按上述操作依次制成10倍系列等比稀釋的樣品勻液備檢。每份樣品選取3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度分別進(jìn)行檢測(cè)。

4.2 抽濾

4.2.1 加30mL無菌水于濾杯中,充分浸濕濾膜。

4.2.2 用無菌量筒量取100mL水樣或稀釋液,倒入濾杯,開啟真空泵,抽濾完100mL水樣后分別用30mL無菌水沖洗濾杯兩次。

4.2.3 關(guān)閉真空泵,移去濾杯,用消毒鑷子輕輕夾取濾膜邊緣,將濾膜格柵面向上覆于MI瓊脂培養(yǎng)基上,用鑷子輕壓或滑動(dòng)濾膜,使其貼緊培養(yǎng)基,防止濾膜邊緣翹起或與瓊脂之間形成氣泡。

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